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[题]血红蛋白测定有哪些方法? WHO和ICSH推荐何种参考方法?简述氰化高铁血红蛋白测定法的实验原理?分享

8291 16 4 2019年11月11日

人体血红蛋白

血红蛋白 亚基 备注
Hb Gower I ζ2ε2 第一个有功能的胚胎期血红蛋白
Hb GowerII a2ε2 胚胎期血红蛋白
Hb Portland ζ2γ2 胚胎期血红蛋白
HbF a2γ2 胚胎期血红蛋白
HbA a2β2 正常成人占95%以上
HbA2 a2δ2 出生后占HB总量2%-3%
HBS 血红蛋白S 镰型红细胞

血红蛋白(hemoglobin, Hb或HGB)是红细胞的运输蛋白,其主要功能是吸收肺部大量的氧,并将其输送到身体各组织。通过铁含量可初步估计血红蛋白量,0.347g铁相当于100g血红蛋白。血红蛋白相对分子量为64 458,单体为16 114,毫摩尔消光系数为11. 0L/(mmol.cm)。每克血红蛋白可携带1. 34ml氧
在人体生长各期,Hb 种类与比例不同。
约妊娠第5周,ζ与ε基因表达于卵黄囊的成红细胞中,形成个体发育中第一个有功能的胚胎期血红蛋白-ζ2ε2(Hb Gower I);
妊娠第6周,成红细胞开始由卵黄囊游移到肝脏,ζ表达水平显著减低,a和γ基因开始表达,形成Hb Gower I (ζ2ε2)、 Hb GowerII (a2ε2)、 Hb Portland (ζ2γ2)和HbF (a2γ2)等胚胎期血红蛋白;
妊娠第8周,ζ和ε链逐渐消失,γ链合成达到最高峰,β链开始合成,形成HbA(a2β2);
妊娠第36周,β链合成迅速增加,γ链合成速率减低;
刚出生时,β链与γ链合成量大致相等;
出生后3个月,β链合成继续增加,γ链合成迅速减低,HbA(a2β2)逐步占Hb总量95%以上,而HbF(a2γ2)逐步降至1%以下。
δ链开始合成时间不很清楚,出生后HbA2 (a2δ2) 占Hb总量的2%~3%。

血红蛋白测定的方法

血红蛋白测定的方法及基本原理


测定方法 测定原理

全血铁

Hb分子组

比重法

血液物理特性

折射仪法血气分析法

Hb与O2可逆性结合的特性

比色法(临床常用)

Hb衍生物光谱特点


常用的比色法有:
氰化高铁血红蛋白(HiCN) 测定法
十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb) 测定法
碱羟血红蛋白(AHD575)测定法
叠氮高铁血红蛋白(HiN3) 测定法
溴代十六烷基三甲铵(CTAB)血红蛋白测定法等
为统一Hb测定方法,1966年国际血液学标准化委员会(ICSH) 推荐HiCN测定法作为Hb测定标准法。
HICN测定法是WHO和ICSH推荐的参考方法


测定方法 优点 缺点
HiCN测定法 参考方法、操作简单、反应速度快、可检测除SHb之外的所有Hb、产物稳定便于质控 KCN有剧毒、高白细胞/高球蛋白血症标本可致浑浊、对HbCO的反慢、不能测定硫化血红蛋白
SDS-Hb测定法 次选方法、操作简单、呈色稳定、试剂无毒、结果准确重复性好 SDS质量差异大、消光系数未定、SDS易破坏白细胞,不适于同时进行白细胞计数的血液分析仪
AHD575测定法  试剂简易,不含毒性,呈色稳定,准确性与精确性较高 575nm波长比色、不便于自动检测、HbF不能转化
HiN3测定法  准确度、精密度较高  试剂仍有毒性(为HiCN的1/7)、HbCO转化慢(20min)
CTAB测定法   溶血性强且不破坏白细胞,适于血液分析仪检测 精密度、 准确性略低


血红蛋白检测原理是比色法,引起血清浊度增大的因素常致血红蛋白浓度假性增高:
如高脂血症、高球蛋白、高白细胞(WBC>30X10^9/L)、 HbCO增多及高血小板(PLT> 700X10^9/L)等

氰化高铁血红蛋白(HiCN) 测定法

HiCN 法检测原理:
在溶血液中,血红蛋白(SHb 除外)中的亚铁离子(Fe2+) 被高铁氰化钾氧化为高铁离子(Fe3+ ),血红蛋白转化成高铁血红蛋白(Hi)。Hi与氰化钾(KCN)中的氰离子反应生成HiCN。HiCN最大吸收波峰为540nm,波谷为504nm。 在特定条件下,毫摩尔消光系数为44L/(mmol.cm)。HiCN在540nm处的吸光度与溶液中的浓度呈正比,根据测得吸光度可求得待测标本的血红蛋白浓度。反应在18~ 25°C中进行,加入非离子表面活性剂可加快红细胞的溶解,减少脂蛋白沉淀产生的溶液浑浊。

血红蛋白参考值

①成年:男性131~172g/L,女性113~151g/L。
②新生儿180~190g/L。
③婴儿: 110~120g/L。
④儿童: 120~140g/L。
⑤老年(>70岁):男性94~122g/L,女性87~112g/L。
以上参考本科教材


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